Post Icon



Юлия скорикова


Во ВГУЭС состоялся научно-практический семинар, посвященный Всемирному дню охраны труда.

28 мая во ВГУЭС состоялся научно-практический семинар, посвященный Всемирному дню охраны труда. Целью семинара явилось привлечение внимания к теме социальной ответственности заинтересованных сторон в обеспечении безопасности труда. Научно-практический семинар прошел в форме докладов, презентаций и дискуссий под общим девизом «Безопасность труда - право каждого человека» и транслировался для филиалов ВГУЭС в Артеме и Находке.

28 мая во ВГУЭС  состоялся научно-практический семинар, посвященный Всемирному дню охраны труда. Целью семинара явилось привлечение внимания к теме социальной ответственности заинтересованных сторон в обеспечении безопасности труда. Научно-практический семинар прошел в форме докладов, презентаций и дискуссий под общим девизом «Безопасность труда - право каждого человека» и транслировался для филиалов ВГУЭС в Артеме и Находке. Организаторами мероприятия выступили кафедра управления персоналом и документоведения ВГУЭС и Центр стратегического партнерства ВГУЭС.

 В семинаре приняли участие заведующая кафедрой управления персоналом и документоведения, кандидат социологических наук Оксана Горшкова, президент ассоциации структур безопасности ДВФО, председатель совета директоров группы компаний «Нико - Секьюрити» Виктор Гутов, профессор кафедры управления персоналом и документоведения Евгений Могилевкин, заместитель главврача по клинико-экспертной работе медицинского центра «Лотос» Людмила Тев, главный специалист по внутреннему аудиту ВГУЭС Ирина Николаева, главный государственный инспектор Гострудинспекции в Приморском крае Татьяна Маленко, сотрудник агентства "Пожарная безопасность" ИП "Палей" Сергей Карпов, руководитель службы кадров ГОУ ВПО ВГМУ "Росздрав" Анна Суворова.

 - Мы планируем сделать подобные семинары традиционными, потому что  вопросы безопасности труда актуальны для каждого человека, - сообщила заведующая кафедрой управления персоналом и документоведения ВГУЭС Оксана Горшкова.

На семинаре был рассмотрен ряд вопросов, касающихся пожарной безопасности, трудового права, охраны организации, имущественной безопасности, охраны здоровья и психологической безопасности труда.

Основными целями мероприятия стали привлечение внимания к теме социальной ответственности, развитие национальной культуры комфортного труда, установление партнерских отношений всех заинтересованных сторон в отношении безопасности труда. В ходе работы участники семинара рассмотрели вопросы организации охраны труда на предприятиях, поделились собственным опытом.

В рамках семинара была организована деловая игра «Общественный контроль за охраной труда на предприятии».

- Благодаря этому семинару я получила массу новых и полезных знаний. Теперь, устраиваясь на работу после окончания вуза, я очень внимательно буду  изучать условия труда на предприятии. Одним из самых интересных выступлений я бы назвала  презентацию заместителя главврача по клинико-экспертной работе медицинского центра «Лотос» Людмилы Тев об организации профосмотров на предприятии. Молодежь порой слишком беспечно относится к проблеме сохранения здоровья, а ведь данная тема весьма актуальна, - высказала мнение студентка 5 курса специальности «Государственное и муниципальное управление» Юлия Скорикова.

- Хотим выразить благодарность за рекомендации и ценные советы по организации и проведению мероприятия нашим коллегам из Центра стратегического партнерства - Оксане Мартыненко и Андрею Караваеву. Приглашенные с их помощью докладчики - давние партнеры ВГУЭС, участники Делового клуба - охотно откликнулись на предложение встретиться на территории нашего университета для обсуждения вопросов безопасности труда, - говорит координатор проекта старший преподаватель кафедры управления персоналом и документоведения Виктория Николаева.

✅ ИП СКОРИКОВА ЮЛИЯ СЕРГЕЕВНА, 🏙 Москва (OГРН 320774600362732, ИНН 616112232807) — 📄 реквизиты, 📞 контакты, ⭐ рейтинг

Последствия пандемии

В полной версии сервиса доступна вся информация по компаниям, которых коснулись последствия пандемии коронавируса: данные об ограничениях работы и о программе помощи от государства тем отраслям, которые испытывают падение спроса

Получить доступ

Краткая справка

ИП СКОРИКОВА ЮЛИЯ СЕРГЕЕВНА было зарегистрировано 09 сентября 2020 (существует 1 год) под ИНН 616112232807 и ОГРНИП 320774600362732. Местонахождение Москва. Основной вид деятельности ИП СКОРИКОВА ЮЛИЯ СЕРГЕЕВНА: 62.01 Разработка компьютерного программного обеспечения. Телефон, адрес электронной почты, адрес официального сайта и другие контактные данные ИП СКОРИКОВА ЮЛИЯ СЕРГЕЕВНА отсутствуют в ЕГРИП.

Информация на сайте предоставлена из официальных открытых государственных источников.

Контакты ИП СКОРИКОВА ЮЛИЯ СЕРГЕЕВНА

Местонахождение

Россия, Москва

Зарегистрирован 09 сентября 2020

Перейти ко всем адресам


Телефоны


Электронная почта


Скорикова, Юлия Григорьевна - Полифенолы плодов и ягод и формирование цвета продуктов [Текст]


Поиск по определенным полям

Чтобы сузить результаты поисковой выдачи, можно уточнить запрос, указав поля, по которым производить поиск. Список полей представлен выше. Например:

author:иванов

Можно искать по нескольким полям одновременно:

author:иванов title:исследование

Логически операторы

По умолчанию используется оператор AND.
Оператор AND означает, что документ должен соответствовать всем элементам в группе:

исследование разработка

author:иванов title:разработка

оператор OR означает, что документ должен соответствовать одному из значений в группе:

исследование OR разработка

author:иванов OR title:разработка

оператор NOT исключает документы, содержащие данный элемент:

исследование NOT разработка

author:иванов NOT title:разработка

Тип поиска

При написании запроса можно указывать способ, по которому фраза будет искаться. Поддерживается четыре метода: поиск с учетом морфологии, без морфологии, поиск префикса, поиск фразы.
По-умолчанию, поиск производится с учетом морфологии.
Для поиска без морфологии, перед словами в фразе достаточно поставить знак "доллар":

$исследование $развития

Для поиска префикса нужно поставить звездочку после запроса:

исследование*

Для поиска фразы нужно заключить запрос в двойные кавычки:

"исследование и разработка"

Поиск по синонимам

Для включения в результаты поиска синонимов слова нужно поставить решётку "#" перед словом или перед выражением в скобках.
В применении к одному слову для него будет найдено до трёх синонимов.
В применении к выражению в скобках к каждому слову будет добавлен синоним, если он был найден.
Не сочетается с поиском без морфологии, поиском по префиксу или поиском по фразе.

#исследование

Группировка

Для того, чтобы сгруппировать поисковые фразы нужно использовать скобки. Это позволяет управлять булевой логикой запроса.
Например, нужно составить запрос: найти документы у которых автор Иванов или Петров, и заглавие содержит слова исследование или разработка:

author:(иванов OR петров) title:(исследование OR разработка)

Приблизительный поиск слова

Для приблизительного поиска нужно поставить тильду "~" в конце слова из фразы. Например:

бром~

При поиске будут найдены такие слова, как "бром", "ром", "пром" и т.д.
Можно дополнительно указать максимальное количество возможных правок: 0, 1 или 2. Например:

бром~1

По умолчанию допускается 2 правки.
Критерий близости

Для поиска по критерию близости, нужно поставить тильду "~" в конце фразы. Например, для того, чтобы найти документы со словами исследование и разработка в пределах 2 слов, используйте следующий запрос:

"исследование разработка"~2

Релевантность выражений

Для изменения релевантности отдельных выражений в поиске используйте знак "^" в конце выражения, после чего укажите уровень релевантности этого выражения по отношению к остальным.
Чем выше уровень, тем более релевантно данное выражение.
Например, в данном выражении слово "исследование" в четыре раза релевантнее слова "разработка":

исследование^4 разработка

По умолчанию, уровень равен 1. Допустимые значения - положительное вещественное число.
Поиск в интервале

Для указания интервала, в котором должно находиться значение какого-то поля, следует указать в скобках граничные значения, разделенные оператором TO.
Будет произведена лексикографическая сортировка.

author:[Иванов TO Петров]

Будут возвращены результаты с автором, начиная от Иванова и заканчивая Петровым, Иванов и Петров будут включены в результат.

author:{Иванов TO Петров}

Такой запрос вернёт результаты с автором, начиная от Иванова и заканчивая Петровым, но Иванов и Петров не будут включены в результат.
Для того, чтобы включить значение в интервал, используйте квадратные скобки. Для исключения значения используйте фигурные скобки.

Резюме «Менеджер по маркетингу и рекламе», Харьков — Work.ua

Резюме от 20 октября 2009

Менеджер по маркетингу и рекламе

Занятость:
Полная занятость.
Возраст:
37 лет
Город:
Харьков

Соискатель указал телефон и эл. почту.

Получить контакты этого кандидата можно на странице https://www.work.ua/resumes/511369/


Дополнительная информация

Скорикова Юлия Владиславовна
61050, г. Харьков, ул. Фейербаха, 5, кв. 38

Образование:
2002-2007 Харьковский государственный университет питания и торговли
Экономический факультет, специализация – маркетинг, стационар

2008 — Треннинг «Трейд-маркетинг в Украине», УАМ, Киев

Опыт работы:
05.2008 — 10.2009 — руководитель направления маркетинга и рекламы ООО «Инком-Авто Харьков» (автоцентр Renault)
Подготовка открытия автоцентра.
Должностные обязанности:
Обеспечение работы автоцентра: полиграфия, внешнее и внутреннее оформление, рекламные песни для менеджеров по продажам
Согласование рекламной активности с представительством Renault в Украине
Подготовка маркетинговых отчетов
Разработка макетов, рекламных акций, анализ эффекктивности, работа с рекламными агенствами, документооборот
Медиапланирование, бюджетирование
Маркетинговые исследования
Написание статей, сценариев, пресс-релизов
Поддержка сайта компании

05.2007 - 05.208 - трейд-маркетинг менеджер – бренд-менеджер ТК «Барвинок» (рынок строительных материалов), работа в национальном масштабе, мультибрендовый портфель.
Разработка и внедрение всех бизнес-процессов компании в разрезе трейд-маркетинга, в частности:
Должностные обязанности:
Разработка и внедрение программ лояльности для торговых сетей, направленных на укрепление партнерства между клиентами и компанией, продвижение продукции на украинский рынок
Разработка и проведение локальных и глобальных акций по стимулированию продаж из торговых точек клиентов (для конечных потребителей), медиапланирование, промо-планирование, бюджетирование, анализ эффективности акции, определение оптимального формата акции для каждого типа розничных торговых точек
Регулярное обновление сайта компании, написание пресс-релизов
Участие в ценообразовании, определении оптимального ассортимента для стандартной/форматной розницы
Анализ рынка, анализ конкурентов, составление рекомендаций
Разработка и внедрение стандарта мерчандайзинга компании
Разработка и внедрение форм отчетности для мерчандайзеров компании, стандартных форм обработки и консолидации полученной информации
Разработка и, в последствии, контроль процесса предоставления демонстрационного оборудования клиентам компании на условиях договора ответственного хранения
Выборочный аудит торговых точек для составления рекомендаций по осуществлению улучшений по представленности продукции в торговом зале
Предоставление отчетов о проведении трейд-маркетинговых мероприятий за определенный период
Составление годичных планов и прогнозов маркетинговой активности компании

01.02.2006-30.11.2006 – супервайзер СКУ ООО «Пирамида» (сектор FMCG

Должностные обязанности:
Контроль работы мерчандайзеров и промоутеров на закрепленной территории
Переговоры с менеджерами торговых сетей, заключение договоров
Сопровождение промо-акций
Отбор и обучение мерчандайзеров и промо-персонала
Ведение отчетности на регулярной основе

01.08.2005-31.01.2006 – мерчандайзер СКУ ООО «Пирамида»
Мониторинг товарных групп компании в торговые точки клиентов
Переговоры с менеджерами торговых сетей
Разработка планограмм, внедрение их в торговые точки
Участие в разработке и проведении промо-акций
Контроль и обучение промо-персонала

Прочее: English – Intermediate, ПК (Word, Excel, 1 C, Internet, Outlook, Visio, PowerPoint, Photoshop)

Коммуникабельность, энергичность, целеустремленность, стрессоустойчивость, способность работать самостоятельно и как «командный игрок», ответственность, ориентация на результат.

24 года

Документы и рекомендации: предъявление по требованию

конт. тел.: [открыть контакты](см. выше в блоке «контактная информация»)
e-mail: [открыть контакты](см. выше в блоке «контактная информация»)


Сравните свои требования и зарплату с вакансиями других компаний:

Участницы конкурса «Мисс Русское Радио» выполнили нормативы ГТО

28 мая 2018 года участницы юбилейного конкурса красоты «Мисс Русское Радио» на базе Учебно-тренировочного центра «Новогорск» приступили к выполнению испытаний комплекса ГТО. Под руководством судей и обладательницы титулов «Мисс Россия» и «Мисс Мира» в 2008 году Ксении Сухиновой 29 девушек проверили уровень своей физической подготовленности. Лучшая по результатам многоборья ГТО будет удостоена победы в специальной номинации «Мисс ГТО» на финальном шоу в Центральном Манеже 31 мая. 

Конкурсанткам предложено выполнить испытания на силу (прыжок в длину с места, подтягивание из виса на нижней перекладине, сгибание и разгибание рук из положения лежа и поднимание туловища), гибкость (наклон вперед из положения стоя), скорость (челночный бег). 

Перед началом выполнения испытаний для девушек была проведена разминка, а затем судьи подробно рассказали и показали правила выполнения предложенных нормативов. 

«Сейчас комплекс ГТО становится модным и популярным среди детей и взрослых. Это всегда здорово – проверить свои возможности и выполнить нормативы. Хорошо, что их снова ввели для жителей страны всех возрастов. Любой может прийти в центр тестирования и пройти испытания. Но при этом нужно готовиться в течение некоторого времени, в зависимости от уровня базовой подготовки, для «золотого» результата, что для большинства моих знакомых, например, стало мотивацией к регулярным занятиям спортом», – отметила Ксения Сухинова. 

Все девушки успешно справились с нормативами, а некоторые выполнили их выше установленных требований. «Рекордами дня» стали: 

– «поднимание туловища из положения лежа» – Юлия Скорикова из Пермского края, 63 раза за минуту; 

– «прыжок в длину с места» – Алина Чунихина из Красноярска, 210 см; 

– «наклон вперед» – Инесса Новикова из Сургута, 24 см ниже уровня скамьи; 

– «подтягивание на низкой перекладине» – Полина Ширяева из Коломны, 25 раз; 

– «челночный бег» – Алина Чунихина из Красноярска, 7,6 сек. 

«Сегодня мы выполнили нормативы ГТО, сложнее всего дались подтягивания и отжимания. Несмотря на то, что спортом занимаюсь регулярно, три раза в неделю, такой подготовки оказалось недостаточно для выполнения на «золото», – поделилась представительница Костромы Анжела Лукина. 

Имена обладательницы титула «Мисс Русское Радио» и победительницы в номинации «Мисс ГТО» станут известны 31 мая. За подготовкой девушек наблюдает съёмочная группа. В июне Телеканал RU.TV покажет выпуски о финалистках конкурса «Мисс Русское Радио» в Москве.

Антитело HCLS1 (AB2) Western AV32615

Общее описание

HCLS1 представляет собой митохондриальный белок, преимущественно экспрессирующийся в тканях сердца и скелета. Известно, что этот белок взаимодействует с HAX1 и LEF-1, который, в свою очередь, регулирует гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF) -опосредованный гранулопоэз. Антитело
Rabbit Anti-HCLS1 распознает HCLS1 человека, крысы, мыши, курицы, собаки, крупного рогатого скота и рыбок данио.

Иммуноген

Синтетический пептид, направленный на N-концевую область человеческого HCLS1

Применение

Кроличьи антитела против HCLS1 (AB2) можно использовать для вестерн-блоттинга в концентрации 1.25 мкг/мл.

Biochem / physiol Actions

HS1, являющийся клеточно-специфическим белком 1 гемопоэтической линии, является субстратом протеинтирозинкиназ в лимфоцитах, связывается с F-актином и способствует опосредованной комплексом Arp2/3 полимеризации актина. Однако механизм взаимодействия между HS1 и F-актином еще полностью не охарактеризован. HS1 содержит 3,5 тандемных повтора, спиральную область и домен Sh4 на С-конце. В отличие от кортактина, который тесно связан с HS1 и требует абсолютно повторного домена для связывания F-актина, мутант HS1 с делецией повторяющегося домена сохраняет значительную активность связывания F-актина.Делеция спирально-спиральной области отменяет способность HS1 связываться с актиновыми филаментами и активировать комплекс Arp2/3 для нуклеации актина и ветвления актина.

Последовательность

Синтетический пептид, расположенный в следующем регионе: FGVERDRMDKSAVGHEYVAEVEKHSSQTDAAKGFGGKYGVERDRADKSAV

Физическая форма

Очищенное антитело, поставляемое в 1x PBS-буфере с 0,09% (масс./об.) азида натрия и 2% азида натрия и 2% азида натрия.

Отказ от ответственности

Если иное не указано в нашем каталоге или другой документации компании, сопровождающей продукт(ы), наши продукты предназначены только для использования в исследовательских целях и не должны использоваться для каких-либо других целей, включая, помимо прочего, несанкционированное коммерческое использование, диагностическое использование in vitro, терапевтическое использование ex vivo или in vivo или любой тип потребления или применения для людей или животных.

.

границ | Ультрачувствительное глубокое секвенирование CSF3R у пациентов с тяжелой врожденной нейтропенией

Введение

Наше текущее понимание патологических механизмов, ответственных за тяжелую врожденную нейтропению (ВН), предполагает, что это гетерогенная группа заболеваний с общим гематологическим и клиническим фенотипом, характеризующимся остановкой созревания миелопоэза на стадии промиелоцитов/миелоцитов, что приводит к периферической абсолютное количество нейтрофилов в крови (АНК) <500 на микролитр и раннее начало бактериальных инфекций.Хотя пациенты с ХН продуцируют физиологические количества G-CSF (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор), их миелоидные клетки-предшественники не могут нормально дифференцироваться в зрелые нейтрофилы; поэтому этим пациентам требуется длительное лечение фармакологическими дозами рекомбинантного человеческого Г-КСФ (рчГ-КСФ, филграстим). Количество рецепторов G-CSF (G-CSFR) на миелоидных клетках-предшественниках у пациентов с ХН довольно повышено, что позволяет предположить, что сигнальные пути ниже по течению от G-CSFR дефектны (1).

За последние 10 лет был достигнут значительный прогресс в выявлении ХН, вызывающих генные мутации.Мутации в гене HAX1 (HCLS1-ассоциированный белок X-1) были идентифицированы как основная генетическая причина синдрома Костмана, подтипа аутосомно-рецессивной ХН (2). Генетический анализ аутосомно-доминантных и спорадических случаев ХН показывает, что большинство этнических европейских пациентов имеют мутаций ELANE , кодирующих нейтрофильную эластазу (эластазу 2) (3). Интересно, что пациенты с циклической нейтропенией (CyN) также имеют мутации в гене ELANE даже в том же нуклеотидном положении (4, 5).Кроме того, мутации в ряде редко затрагиваемых генов, среди них, например, G6PC3 (глюкозо-6-фосфатаза, каталитическая, 3) (6), GFI1 (независимый от фактора роста 1) (7), TAZ (тафаззин ) (8), WAS (синдром Вискотта-Олдрича) (9) и JAGN1 (ягунальный гомолог 1) (10) были идентифицированы при ХН (11).

Описаны различные приобретенные точечные мутации во внутриклеточном домене G-CSFR. Эти мутации вводят преждевременные стоп-кодоны, что приводит к усечению G-CSFR (12–19).Трансфекция мутантного рецептора Г-КСФ с укороченной внутриклеточной частью в мышиные клеточные линии индуцировала гиперпролиферативные ответы на Г-КСФ (12). Эти эффекты также наблюдаются после совместной экспрессии рецепторов дикого типа и усеченных рецепторов; этот так называемый доминантно-негативный эффект отражает данные пациентов в случаях, когда мутирован только один аллель. Интересно, что существует высокая частота трансформации в миелодисплазию (МДС) или острый миелоидный лейкоз (ОМЛ) у пациентов с приобретенными мутациями CSF3R , что позволяет предположить, что эти мутации участвуют в развитии лейкемии (19).Наша гипотеза состоит в том, что мутации CSF3R возникают в гемопоэтических стволовых клетках под селективным давлением и присутствуют на низком уровне до тех пор, пока этот клеточный клон не станет доминирующим в результате непрерывной обработки rhG-CSF и приобретения дополнительных мутаций в ассоциированных с лейкемией генах, таких как RUNX1 (фактор транскрипции 1, связанный с рантами) (20).

Несколько исследователей сообщили об идентификации приобретенных мутаций CSF3R у пациентов с ХН. Частота мутаций и методы обнаружения сильно различались между этими исследованиями (19, 21, 22).На сегодняшний день многие исследователи прямо секвенировали ПЦР-фрагменты внутрицитоплазматического домена G-CSFR. Используя классический метод секвенирования Сэнгера, по крайней мере 15–20% исследованных клеток должны содержать мутации, чтобы дать положительные результаты; таким образом, этот метод не позволяет обнаруживать небольшие субклоны CSF3R -мутированных клеток. Недавно мы подробно изучили эту проблему, сообщив о результатах, полученных путем секвенирования нескольких клонов, полученных из ПЦР-фрагментов внутрицитоплазматической области G-CSFR от отдельных пациентов с ХН.Используя до 45 клонов, созданных из мРНК каждого пациента и размноженных в виде рекомбинантных плазмид в Escherichia coli , мы обнаружили, что можно обнаружить ~ 5% РНК, несущих мутаций CSF3R (19).

Секвенирование следующего поколения значительно расширило наши возможности по выявлению генетических изменений в геноме. Этот новый подход позволяет обнаруживать малочисленные генетические аберрации, что делает его полезным для обнаружения и мониторинга начальных генетических повреждений при ОМЛ на ранней стадии лейкемогенеза.Наряду с чувствительным обнаружением низкочастотных минорных мутантных аллелей глубокое секвенирование позволяет точно определять частоты аллелей.

Мы применили чувствительное глубокое секвенирование продуктов ПЦР критической области CSF3R с глубиной более 900 000, чтобы обнаружить присутствие мутаций CSF3R в ходе лейкемогенеза. Мы также исследовали влияние мутаций CSF3R и однонуклеотидных полиморфизмов (SNP) в CSF3R на чувствительность к G-CSF у пациентов с ХН.

Материалы и методы

Пациенты и контрольная группа

Диагноз у

больных ХН был поставлен на основании результатов значений АНК периферической крови <0,5×10 9 /л в течение 3 мес, исследований аспиратов костного мозга, наличия в анамнезе рецидивирующих тяжелых инфекций и отрицательных результатов на гранулоцитарно-специфические антитела. Все пациенты с клиническим диагнозом ХН были обследованы на наличие мутаций ELANE, HAX1, JAGN -1 и G6PC3 . В случае отрицательного результата выполняли генную панель синдромов костномозговой недостаточности NGS.

Всего ДНК 54 пациентов с ХН, 17 ЦН, 25 СШД, 19 пациентов с ХН-МДС/ОМЛ, а также 16 пациентов с идиопатической нейтропенией и 7 пациентов с аутоиммунной нейтропенией (АиН) была подвергнута глубокому секвенированию ДНК CSF3R . Кроме того, мы секвенировали группы пациентов с клиническими диагнозами, не связанными с нейтропенией, такими как детский de novo CML ( n = 14), de novo AML ( n = 10). Мы также использовали образец КМ от здоровых доноров без ( n = 11) или с ( n = 2) лечением rhG-CSFR (таблица S1). CSF3R Глубокое секвенирование образцов кДНК было выполнено с использованием РНК, выделенной из 68 пациентов с ХН, 12 CyN, 13 SDS, 5 CN-MDS/AML, 15 идиопатических и 2 пациентов с AiN (таблица 1). В исследование также были включены девять пациентов с наследственными синдромами, ассоциированными с тяжелой нейтропенией (синдром Коэна, синдром WHIM, GSD-1b, синдром Пирсона, синдром Барта, DBA, синдром Германского-Пудлака) (табл. 1). В среднем более 2 образцов на одного пациента с ХН обычно собирались в течение 1–3 лет наблюдения и были доступны для глубокого секвенирования.

Таблица 1 . Распространенность приобретенных мутаций CSF3R в исследуемых группах с использованием глубокого секвенирования кДНК.

Образцы костного мозга и крови у пациентов были собраны в связи с ежегодным последующим наблюдением, рекомендованным Международным регистром тяжелой хронической нейтропении. Одобрение исследования было получено от Совета по этике медицинского факультета Тюбингенского университета. Информированное согласие было получено в соответствии с Хельсинкской декларацией.

Выделение нуклеиновой кислоты

Мононуклеарные клетки костного мозга (BM-MNC) и полиморфноядерные клетки (BM-PMN), а также мононуклеарные клетки периферической крови (PB-MNC) выделяли методом центрифугирования в градиенте Ficoll-Hypaque (Amersham Biosciences, UK). Полиморфноядерные клетки периферической крови (ПВ-ПЯЛ) выделяли с помощью полиморфпрепа (AXIS-SHIELD PoC AS, Норвегия). Клетки CD34 + и CD33 + отделяли от BM-MNC методом позитивной селекции после инкубации с соответствующим набором MicroBead Kit (Miltenyi Biotec) по стандартному протоколу.Чистота выделенных клеток CD34 + и CD33 + составила более 80% по оценке методом проточной цитометрии. РНК выделяли с помощью набора RNeasy Mini Kit (Qiagen, Германия) в соответствии с протоколами производителей. Для очистки ДНК использовали набор DNeasy Blood and Tissue Kit (Qiagen, Германия).

Мутационный скрининг

Мутационный скрининг ELANE, HAX1, JAGN1, G6PC3 и CSF3R с помощью секвенирования по Сэнгеру проводили с использованием BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit на генетическом анализаторе ABI 3130 (Applied Biosystems, США) по стандартному протоколу секвенирования. Последовательности праймеров перечислены в таблице S2. В сотрудничестве с CeGaT (Германия) образцы пациентов с ХН, отрицательные по мутациям в ELANE, HAX1, JAGN1, G6PC3 и CSF3R , были подвергнуты подходу секвенирования панели генов для выявления потенциальных мутаций в 230 генах, которые, как известно, связаны с наследственными заболеваниями. гематологические нарушения.

CSF3R Глубокое секвенирование ДНК

ДНК экстрагировали из пациентов и добровольцев BM и PB, как описано выше.Фрагменты гена CSF3R (4,4, 5,0 и 5,4 т.п.н.) амплифицировали методом ПЦР дальнего действия. Продукты ПЦР были разработаны для покрытия всех экзонов и интронов гена CSF3R, за исключением интрона 3, который был исключен из-за низкой консервативности среди позвоночных и высокого обогащения повторяющихся последовательностей ДНК низкой сложности. Для всех пациентов секвенирование всех 3 продуктов ПЦР дальнего действия проводили только один раз. Во всех последующих образцах ДНК был секвенирован продукт ПЦР размером 5,0 т.п.о., который включает критическую область CSF3R .

продукта ПЦР использовали в качестве матрицы для создания библиотеки фрагментов с помощью ультразвукового прибора Covaris S2 (Covaris, Inc., США). Амплификацию фрагментов размером 4,4 и 5,0 т.п.н. проводили с использованием набора ДНК-полимеразы Phusion High-Fidelity (Thermo Fisher Scientific Inc., США) и метода ПЦР с тачдауном (таблицы S3, S5). Фрагмент размером 5,4 т.п.н. амплифицировали с использованием смеси полимераз Advantage Genomic LA (Clontech Laboratories, Inc., Калифорния, США) (таблицы S4, S5). Обработанные ультразвуком фрагменты ДНК отбирали по размеру с использованием реагента Agencourt AMPure XP Bead Reagent (Beckman Coulter, Inc., США). Ферментный модуль 5500 SOLiD Fragment Library (PN 4464413; Life Technologies, США) использовали для выполнения затупления / полировки концов, dA-хвостов, лигирования адаптеров и штрих-кодов с ДНК выбранного размера. Для очистки лигированной ДНК использовали реагент Agencourt AMPure XP (Beckman Coulter, Inc., США). После эмульсионной ПЦР и обогащения гранул 3'-модифицированные гранулы наносили на предметное стекло и секвенировали лигированием с использованием секвенатора 5500XL SOLiD (Life Technologies, США).

Для предварительной обработки входные последовательности подверглись коррекции ошибок De Novo для данных SOLiD с использованием инструмента повышения точности SOLiD (Life Technologies, США).Чтения, выровненные с помощью NovoAlignCS (novocraft.com), были собраны в виде файлов SAM, а затем применены к нашему специальному конвейеру секвенирования следующего поколения (V0.03), который включает следующий рабочий процесс: SAMtools (23) для создания файлов BAM, инструменты Picard для дублирования. удаления, набор инструментов для анализа генома для перестройки indel (Институт Броуда, США), SAMtools для вызова вариантов и AnnTools (24) для аннотирования обнаруженных однонуклеотидных вариантов. Принимались только варианты с показателем качества Phred > 20.

Для секвенирования полного гена CSF3R мы выбрали частоту мутантного аллеля (MAF), равную 0.02 в качестве порога по умолчанию для вызовов-кандидатов и 0,007, если количество чтений превысило более чем 5000-кратную глубину покрытия в позиции мутации.

CSF3R Глубокое секвенирование кДНК

РНК экстрагировали из PB-MNC, PB-PMN, BM-MNC и BM-PMN, как описано выше. Чистоту и выход РНК измеряли на Nanodrop. Обратную транскрипцию проводили с помощью набора Omniscript RT Kit (Qiagen, Германия) в соответствии с протоколом производителя. Фрагменты гена CSF3R (236 и 198 п.н.) амплифицировали с помощью ПЦР (таблицы S6, S7).Фрагменты ПЦР отбирали по размеру и очищали с использованием реагента Agencourt AMPure XP Bead Reagent (Beckman Coulter, США). Перед приготовлением библиотеки продукты ПЦР анализировали на Bioanalyzer (Agilent, США) для контроля чистоты.

Библиотеки для секвенирования

готовили в соответствии с протоколом подготовки библиотеки для метагеномного секвенирования 16S от Illumina (часть № 15044223Rev.B). Индексную ПЦР проводили с использованием набора Nextera XT Index Kit (Illumina, США). Для очистки использовали бусины AMPure XP Beads (Beckman, США). Количественное определение библиотек проводили с помощью набора Qubit HS Kit (Thermo Fisher Scientific, США) и анализировали с помощью набора Bioanalyser HS DNA Kit (Agilent, США).Секвенирование проводили на секвенаторе Illumina (NovaSeq 6000) в режиме секвенирования 2x100 п.н. с использованием проточной кюветы NovaSeq 5000/6000 S2 и прибл. Выход 0,6 Гб на образец.

Демультиплексирование, секвенирование ридов, обрезка, выравнивание, определение вариантов и аннотирование выполнено провайдером NGS CeGaT (Германия). Демультиплексирование прочтений секвенирования выполняли с помощью Illumina bcl2fastq (2.19). Адаптеры были обрезаны Шпажкой (версия 0.2.2) (25). Обрезанные необработанные чтения были сопоставлены с эталонным геномом человека (hg19) с использованием выравнивателя Burrows-Wheeler (BWA-mem версии 0.7,17-кирпич) (26). Низкочастотные варианты были обнаружены с помощью LoFreq (версия 2.1.2) (27). Качество картирования определяли с помощью Burrows-Wheeler Aligner. Позиции с охватом ≥ 10 000 и качеством картирования не менее 15 (Phred-Score) были включены для варианта вызова, используемого для анализа. Качество файлов FASTQ анализировали с помощью FastQC (версия 0.11.5-cebat) (28). Графики были созданы с помощью ggplot2 (29) в R (30). Значение MAF, равное 0,001, было выбрано в качестве порогового значения по умолчанию для потенциальных вызовов.

Статистический анализ

Статистический анализ был выполнен с использованием R (30), Excel (Microsoft, США) и Prism 7 версии 7.03 (программное обеспечение GraphPad, США).

Результаты

Глубокое секвенирование всей ДНК CSF3R , а также критической области CSF3R кДНК

Для анализа глубокого секвенирования мы либо секвенировали продукты ПЦР всего гена CSF3R (за исключением интрона 3), либо амплифицировали кДНК внутриклеточной области G-CSFR, которая, как сообщалось, была мутирована у пациентов с ХН и ХН-МДС/ОМЛ. Эта область находится между 715 и 787 положениями аминокислот (NP_000751.3) и включает четыре консервативных остатка тирозина (Y727, Y752, Y767 и Y787), которые действуют как сайты стыковки для белков, содержащих домен Sh3 (рис. 1А) (31). , 32).

90 083 Рычина 1 90 084. Распределение приобретенных мутаций в экзоне 17 CSF3R у пациентов с ХН и ХН-МДС/ОМЛ. Схематическое изображение экзона 17 гена CSF3R вместе с последовательностью белка (NP_000751.3), показывающее четыре консервативных остатка тирозина. Указаны положения аминокислот, соответствующие экзону 17. Красным отмечена внутриклеточная критическая область CSF3R . Положения аминокислот (AA) мутаций гена CSF3R ограничены областью между аминокислотными остатками 715 и 787.Мутации в G-CSFR, связанные с лейкемией и МДС при ХН, обозначают «AML» или «pre-B ALL», * - стоп-кодон. (B) Межсерийная воспроизводимость между CSF3R циклами глубокого секвенирования ДНК. Воспроизводимость между сериями оценивалась путем секвенирования 13 мутаций CSF3R у 11 пациентов с ХН в двух отдельных сериях.

Средний возраст пациентов на момент сбора образцов составлял 13 лет (25-й процентиль = 5,32, 75-й процентиль = 17,02) для образцов кДНК и 12 лет (25-й процентиль = 5.6, 75-й процентиль = 20,11) для образцов ДНК. Всего мы секвенировали 276 образцов ДНК и 289 образцов кДНК. Пациенты, включенные в исследование, представлены в Таблице 1 и Таблице S1.

В соответствии с предыдущим отчетом (19) мы обнаружили, что 73,7% (14/19) пациентов с ХН на стадии ОМЛ или МДС приобрели мутации CS3FR . Мы обнаружили мутацию CSF3R у 1 из 10 педиатрических пациентов с de novo ОМЛ, и у 14 педиатрических пациентов с ХМЛ мутации не были обнаружены (таблица S1).

Уровень межсерийной воспроизводимости оценивали путем повторного секвенирования образцов ДНК от 11 больных ХН, в которых было выявлено 13 мутаций CSF3R со значениями MAF от 2 до 19%. Результаты повторного секвенирования показали высокий уровень соответствия MAF ( R 2 = 0,89) с последовательным обнаружением всех 13 мутаций в последующем запуске (рис. 1B).

Путем секвенирования образцов ДНК мы выявили мутаций CSF3R у 20,4% (11/54) пациентов в группе с генетически определенным ХН и у 28.5% (2/7) генетически неклассифицированных пациентов с ХН. Высокая частота мутаций CSF3R наблюдалась у пациентов с ХН, несущих мутации HAX1 или ELANE (30% (3/10) и 22,2% (8/36) соответственно).

Примечательно, что с помощью глубокого секвенирования образцов кДНК (таблица 1) мы обнаружили мутаций CSF3R почти у половины пациентов с ХН (47,1% (32/68) в группе с генетически определенным ХН и 57,1% (16/28) в неклассифицированной группе). КН). Мы также обнаружили мутаций CSF3R у двух пациентов с CyN.В других исследуемых группах мутаций CSF3R обнаружено не было (табл. 1). Восемьдесят процентов (4/5) пациентов с ХН-МДС/ОМЛ были положительными в отношении мутаций CSF3R (таблица 1).

С помощью глубокого секвенирования кДНК CSF3R было идентифицировано 163 мутантных клона в 77 образцах генетически определенных пациентов с ХН со средним MAF 0,051 и медианным MAF 0,018. У генетически неклассифицированных пациентов с ХН мы насчитали 48 мутантных клонов CSF3R в 28 положительных образцах со средним значением MAF, равным 0.074 и медиана MAF 0,025. Не наблюдалось существенной разницы в MAF между генетически определенными и неклассифицированными группами CN (тест Манна-Уитни U : U = 3240, P > 0,99) (рис. 2А).

Рисунок 2. (A) Сравнение частот мутантных аллелей CSF3R у пациентов с ХН и генетически неклассифицированных пациентов с ХН. Не наблюдалось существенной разницы в MAF мутаций CSF3R между группами CN ( n = 163) и генетически неклассифицированными CN ( n = 48); н.с.- не существенно. (B) Приобретение мутаций CSF3R не связано с более высокими дозами rhG-CSF. Пациенты были разделены на 2 группы на основании наличия ( n = 40) или отсутствия ( n = 54) мутаций CSF3R , обнаруженных с помощью глубокого секвенирования кДНК. Дозы rhG-CSF на момент взятия образца нанесены на график для обеих групп; н.с., не имеет значения.

Отсутствие корреляции между приобретением мутации CSF3R и терапевтической дозой G-CSF

Из 102 пациентов, для которых была доступна информация о лечении rhG-CSF, 96 получали лечение rhG-CSF и оценивались на предмет связи приобретенной мутации CSF3R с дозой rhG-CSF.Мы сравнили 40 пациентов с мутациями CSF3R (12 ELANE -CN, 9 HAX1 -CN, 1 JAGN1 -CN, 3 CN-MDS/AML, 13 генетически неклассифицированных пациентов с CN и 2 пациентов с CyN) с 54 пациентами. без мутаций CSF3R (10 ELANE -CN, 9 HAX1 -CN, 2 G6PC3 -CN, 1 JAGN1 -CN, 1 CN-MDS/AML, 11 генетически неклассифицированных CN,6 CN, 7 Cy SDS, 1 пациент с идиопатической нейтропенией, а также 6 пациентов с наследственными синдромами, ассоциированными с тяжелой нейтропенией (3 синдром Коэна, 1 синдром Барта, 1 WHIM, 1 GSDIb).Пациенты с мутациями CSF3R зародышевой линии ( n = 2) были исключены из анализа. Интересно, что мы не наблюдали разницы в дозе rhG-CSF, необходимой для достижения более 1000 нейтрофилов/мкл, между пациентами с приобретенными мутациями CSF3R и без них (тест Манна-Уитни U : U = 890, P ). = 0,1473) (рис. 2Б).

Самая высокая чувствительность обнаружения мутаций CSF3R наблюдалась в кДНК PB-PMN

Мы сравнили MAF мутаций CSF3R между кДНК и ДНК, выделенной из разных клеточных фракций пяти пациентов с ХН, и обнаружили самый высокий MAF в PB-PMN у всех исследованных пациентов с ХН (рис. 3A-E) по сравнению с BM-MNC, BM-PMN и PB-MNC.Как и ожидалось, наибольшая чувствительность была достигнута при секвенировании образцов кДНК. Основываясь на этих наблюдениях, мы предлагаем секвенировать кДНК PB-PMN, чтобы добиться обнаружения низкочастотных клеточных клонов с мутантным CSF3R .

90 083 Рисунок 3 90 084. Сравнение результатов глубокого секвенирования различных типов образцов периферической крови (ПБ) и костного мозга (КМ) у пациентов с ХН и ЦН. Частота мутантных клонов CSF3R в различных типах образцов PB и BM от пациентов ELANE -CN (A, B) , пациента CyN (C) и пациентов HAX1 -CN ( D, E ) анализировали с использованием глубокого секвенирования кДНК, как описано в разделе «Материалы и методы».Мутантные клоны CSF3R указаны на основе относительных аминокислотных положений мутаций.

Динамика и количество мутаций CSF3R у пациентов с ХН

У некоторых пациентов с ХН мы выявили множественные мутации CSF3R (рис. 4). Приобретение множественных мутаций CSF3R не зависело от типа мутаций, вызывающих ХН. Процент клеток, экспрессирующих мутантный CSF3R , менялся в течение лет наблюдения с увеличением MAF для некоторых клонов, но также и со снижением MAF для других клонов (фиг. 4).Множественные мутантные клоны CSF3R были обнаружены с помощью секвенирования либо кДНК (фиг. 4A-D), либо ДНК (фиг. 4E). Интересно, что у одного пациента ELANE -CN все PB-PMN приобрели мутацию CSF3R в положении p.Q749 * (рис. 4А). Однако только незначительная часть гемопоэтических стволовых клеток CD34 + костного мозга пациента имела эту мутацию (5,45% от общего числа клеток CD34 + и 12,08% G-CSFR, экспрессирующих клетки CD34 + ) (рис. 4А).

90 083 Рисунок 4 90 084. Динамика мутаций CSF3R в последовательных образцах пациентов с ХН, обнаруженных с помощью кДНК и глубокого секвенирования ДНК. (A – D) На график нанесен процент клеток, экспрессирующих мутант CSF3R в разные моменты времени (в годах), начиная с даты первого анализа мутации CSF3R у данного пациента. Все мутации считаются гетерозиготными. Мутантные клоны CSF3R указаны на основании относительного положения аминокислот в сайтах мутаций.По оценкам, число клеток с мутацией CSF3R в два раза превышает число прочтений, поддерживающих мутантный аллель, * - стоп-кодон. (E) Динамика возникновения мутаций CSF3R и частота мутантных аллелей в образцах ДНК пациентов с ХН, обнаруженных с помощью глубокого секвенирования ДНК CSF3R . На график нанесена частота встречаемости мутантных аллелей в разные моменты времени (в годах) у данного пациента. По оценкам, число клеток с мутацией CSF3R в два раза превышает число прочтений, поддерживающих мутантный аллель, * - стоп-кодон.

Для пяти пациентов с ХН с множественными мутациями CSF3R мы исследовали, присутствуют ли мутации в одном и том же аллеле. Интересно, что все бессмысленные мутации в CSF3R принадлежат разным аллелям (данные не показаны) .

Низкочастотные SNP в области кодирования CSF3R

Затем мы спросили, влияют ли генетические полиморфизмы в гене CSF3R на реакцию G-CSF и, в свою очередь, способствуют лейкемогенной трансформации у пациентов с ХН.Нами была составлена ​​матрица соответствия со всеми выявленными SNP для 83 пациентов с имеющейся информацией о терапевтической дозе рчГ-КСФ. Для отбора пациентов, сгруппированных по комбинациям SNP, мы использовали иерархическую кластеризацию с расстояниями Жаккара и однофакторный дисперсионный анализ и не обнаружили каких-либо существенных различий в дозах rhG-CSF между группами.

Мы проанализировали варианты нуклеотидов, идентифицированные в кодирующей области CSF3R . Среди 598 генетических вариантов, перечисленных в общедоступных базах данных, 94 являются миссенс-вариантами, и почти 25% из них имеют частоту минорного аллеля (MAF) <0.05. Шесть SNP связаны с деструктивными эффектами (таблица S8). В когортах наших пациентов мы выявили 13 SNP с MAF <0,05 и 3 новых варианта (таблицы S9, S10). Наиболее часто выявляемыми вариантами с низким MAF были p.D510H (9/173) и p.D320N (9/173) (таблица S10). Было предсказано, что SNP p.D510H оказывает повреждающее воздействие на функции белка с помощью 4 из 6 алгоритмов прогнозирования in silico (таблица S9). Терапевтические дозы rhG-CSF у пациентов с ХН, несущих этот SNP, варьировали от 0.2 и 11,3 мкг/кг/сут. SNP p.D320N, который расположен в консервативном домене гомологии цитокинового рецептора, был предсказан как доброкачественный всеми шестью алгоритмами предсказания. Интересно, что у одного пациента с CyN мы обнаружили новый полиморфизм нуклеотидов в p.M222T в домене, подобном фибронектину типа III, рецептора G-CSF, который, согласно 4 различным алгоритмам, будет оказывать серьезное влияние на функцию белка (таблица S9).

Мы идентифицировали одного пациента с ХН с SNP p.R311C, который имеет новый вариант, p.Q114 * в CSF3R и отсутствие мутаций в ELANE, HAX1, G6PC3 и GFI1 . Из всех идентифицированных редких SNP p.R311C оказывал наиболее сильное влияние на структуру и функцию белка (таблица S9). Пациент с ХН с p.R311C и p.Q114 * SNPs отвечает на высокие дозы rhG-CSF (средняя доза 40 мкг/кг/день), и нельзя исключить роль этих вариантов как потенциальных причинных факторов нейтропении. Кроме того, у одного пациента с ХН без ответа на биаллельную потерю функции G-CSF мутаций CSF3R : гетерозиготный SNP p.Были обнаружены W547* и новая мутация в 3'-акцепторном сайте сплайсинга интрона 8 c.998-2A> T (таблица S10) (33). За исключением одного пациента с ХН с SNP p.D510H, ни у одного другого пациента с низким уровнем G-CSF или без ответа не было генетических изменений в гене CSF3R. Четыре редких SNP (p.M231T, p.Q346R, p.E405K и p.A750T) были идентифицированы у пациентов с ХН, которым требовалась доза Г-КСФ <2 мкг/кг/сут, и один SNP (p.E149D) был обнаружен у пациента с ХН, который не лечился Г-КСФ. Интересно, что 1 пациент с ХМЛ и 1 пациент с ХН несли SNP p.E808K, который, как известно, коррелирует с высоким риском развития МДС (34).

Обсуждение

Мы впервые продемонстрировали создание чувствительной технологии NGS, которая позволяет идентифицировать низкочастотные клеточные клоны с приобретенными мутациями CSF3R в гене CSF3R в большой группе пациентов с различными типами ХН. Мы обнаружили, что сверхглубокое секвенирование кДНК заметно повысило чувствительность и идентификацию мутантных клонов CSF3R с MAF 0,001. Гораздо более высокая чувствительность кДНК CSF3R по сравнению с глубоким секвенированием ДНК может быть объяснена в среднем 900-кратным увеличением глубины секвенирования и отбором клеточной популяции, экспрессирующей G-CSFR.Мы предполагаем, что дальнейшее повышение чувствительности может привести к идентификации мутаций CSF3R практически у всех пациентов ELANE -CN и HAX1 -CN. Наши результаты также предполагают, что клоны HSC с приобретенными мутациями CSF3R являются не лейкемическими, а предлейкемическими клонами с повышенной восприимчивостью к вторичным лейкемогенным событиям (например, мутация RUNX1 , трисомия 21) и явным МДС или ОМЛ. Мы не обнаружили корреляции между наличием мутаций CSF3R и тяжестью заболевания или дозой G-CSF, необходимой для достижения достаточного количества нейтрофилов.

Предыдущие исследования сообщали о противоречивых данных о безопасности лечения Г-КСФ (35–37). Это важный вопрос, поскольку Г-КСФ используется не только для лечения различных типов ХН, но также применяется при нейтропении, вызванной химиотерапией, и для индукции мобилизации стволовых и прогениторных клеток CD34 + для аутологичной или аллогенной трансплантации. Чтобы определить, вызывает ли долгосрочное лечение G-CSF per se приобретение мутаций CSF3R или это явление, специфичное для ХН, мы исследовали связь между лечением G-CSF и приобретением мутаций CSF3R .Не было никакой разницы в терапевтической дозе G-CSF между пациентами с мутациями CSF3R или без них. Интересно, что мы не обнаружили приобретенных мутаций CSF3R в большой группе пациентов с СШД, которые находились на длительном лечении Г-КСФ. Это соответствует отчету Xia et al. которые продемонстрировали, что клональный гемопоэз из-за мутаций в TP53 , но не CSF3R , присутствовал у пациентов с SDS, но не был обнаружен у здоровых людей или пациентов с CN (38).Мы также не обнаружили приобретенных мутаций CSF3R у здоровых людей, получавших лечение G-CSF, хотя группа была небольшой, а лечение G-CSF было кратковременным. Приобретенные мутации CSF3R были обнаружены исключительно у пациентов с ХН. Эти наблюдения убедительно доказывают безопасность терапии Г-КСФ. Скорее всего, внутриклеточные молекулярные дефекты, характерные для нарушения гранулопоэза у пациентов с ХН (39), а не терапия Г-КСФ как таковая , ответственны за приобретение мутаций CSF3R в некоторых клонах ГСК и клональный избыточный рост этих клонов.

Мы показали в этом отчете и в более ранних исследованиях (19), что ~ 80% пациентов с ХН, у которых развился лейкоз, приобрели мутации CSF3R , и что все лейкозные клетки у этих пациентов поражены этими мутациями. Наш подход к секвенированию CSF3R позволяет напрямую оценить частоту мутантных клеток CSF3R , что невозможно при секвенировании по Сэнгеру и в определенной степени возможно при секвенировании по Сэнгеру клонированных продуктов ПЦР. Свидетельства клонального кроветворения у больных ХН без признаков злокачественной трансформации позволяют предположить, что вторичные промотирующие мутации (e.g., в RUNX1, ASXL1, SUZ12 или EP300 ) (20, 40) необходимы для трансформации мутантного клона CSF3R в костном мозге. Благодаря ежегодному мониторингу мутаций CSF3R у пациентов с ХН с использованием глубокого секвенирования мы смогли проследить предлейкемические клоны в течение длительного периода времени. Секвенирование дополнительных генов, о которых известно, что они связаны с лейкемогенезом при ХН (например, RUNX1 ), может помочь выявить ранние стадии злокачественной трансформации и сыграть решающую роль в принятии клинических решений.

Время между приобретением мутаций CSF3R и явным лейкозом существенно различается, некоторые пациенты являются носителями мутаций CSF3R более 10 лет. Интригует сохранение мутантных клонов в течение многих лет у пациентов с ХН без явной лейкемии. Интересно, что последовательный анализ одних и тех же пациентов в разные моменты времени привел к увеличению обнаружения мутаций CSF3R до 34% (19). В нашем исследовании мы обнаружили, что почти 50% пациентов с ХН приобрели мутаций CSF3R .Основываясь на этих данных, мы предполагаем, что субклон предлейкемических клеток, несущих мутаций CSF3R с частотой ниже нашего предела обнаружения, может присутствовать в течение длительного времени и развиваться до частоты, обнаруживаемой методом глубокого секвенирования в ответ до, например, стресса ER из-за ответа развернутого белка (UPR), вызванного мутациями зародышевой линии. Это также подтверждается тем фактом, что некоторые клоны, несущие мутаций CSF3R , развились и снова исчезли ниже предела обнаружения, но, скорее всего, не исчезли полностью (19, 20).

Интересно, что приобретение мутаций CSF3R у пациентов с ХН не зависело от унаследованного мутационного статуса (таблица 1). Эти данные согласуются с нашими предыдущими наблюдениями о том, что компоненты передачи сигналов рецептора G-CSF, такие как факторы транскрипции LEF-1 и C/EBPα, значительно снижены в миелоидных клетках-предшественниках пациентов с ХН, несущих мутации ELANE или HAX1 (41). ).

Все приобретенные мутации, выявленные нами у пациентов с ХН и ХН-МДС/ОМЛ с использованием технологии глубокого секвенирования, были локализованы в области, кодирующей критический внутрицитоплазматический домен G-CSFR, которая известна как единственная область, мутировавшая при ХН-МДС/ Больные ОМЛ (19, 42).Эта область имеет четыре консервативных остатка тирозина, необходимых для соответствующей активации и подавления передачи сигналов G-CSFR с помощью STAT3 (преобразователь сигналов и активатор транскрипции 3) и SOCS3 (супрессор передачи сигналов цитокинов 3) соответственно (31). Отсутствие этих консервативных остатков тирозина в клетках, экспрессирующих укороченный G-CSFR, может привести к сильному пролиферативному преимуществу (43-45).

Мы и другие исследователи идентифицировали пациентов с ХН с биаллельными мутациями CSF3R зародышевой линии во внеклеточном домене рецептора, которые приводят к нечувствительности к Г-КСФ (33, 46).Мы предлагаем секвенировать всю кодирующую последовательность CSF3R у «не ответивших» G-CSF. Все пациенты с ХН, независимо от их мутационного статуса, за исключением пациентов с СШД, должны проходить ежегодное глубокое секвенирование критической внутриклеточной области CSF3R .

Интересно, что у одного из десяти педиатрических пациентов с de novo AML мы также идентифицировали бессмысленную мутацию CSF3R , которая была расположена в критической области G-CSFR и затрагивала один из четырех незаменимых остатков тирозина (Y787).У детей с ХМЛ мутаций не наблюдалось; однако у одного пациента с ХМЛ был обнаружен редкий SNP, p.E808K, который, как известно, коррелирует с развитием МДС высокого риска (34). Мутации CSF3R у de novo пациентов с ОМЛ встречаются очень редко, а мутации, приводящие к отсутствию функционально важных остатков тирозина, ранее не были описаны (47–49). Для оценки роли мутаций CSF3R и редких SNP в развитии de novo AML и CML потребуются дальнейшие исследования более крупных групп пациентов с ОМЛ и ХМЛ.

До сих пор роль SNP в CSF3R у пациентов с ХН была неясна. Секвенировав весь ген CSF3R, мы смогли идентифицировать и проанализировать редкие SNP. Мы идентифицировали 13 dbSNP с MAF <0,05, 2 новых варианта в кодирующей области и один вариант в интрон-экзонном соединении (таблица S10). Однако четких корреляций между наличием отдельных редких SNP и типом нейтропении, потребностью в дозе Г-КСФ, прогрессированием лейкемии или тяжестью заболевания обнаружено не было. Только 2 из 10 пациентов с ХН с плохой реакцией на Г-КСФ или без нее имели редкий SNP, эффективно исключающий врожденные дефекты в CSF3R как основную причину плохой реакции/отсутствия реакции, по крайней мере, в этой исследуемой группе.

Таким образом, мы сообщили о создании чувствительного глубокого секвенирования CSF3R для оценки статуса мутации CSF3R у пациентов с нейтропенией. Мы предлагаем секвенирование кДНК PB-PMN для мониторинга гемопоэтических клонов, которые приобрели мутаций CSF3R за годы. Мы обнаружили, что приобретение мутаций CSF3R является специфичным для ХН явлением и не наблюдается у пациентов с другими типами нейтропении, хронически получающих rhG-CSF.

Вклад авторов

JS и KW разработали исследование и руководили им.МК и ИС выполнили основные эксперименты. MU, SK и MK проанализировали данные глубокой последовательности. РН помогла с подготовкой проб для NGS. JS, KW и MK проанализировали данные и написали рукопись. CZ и SM-H предоставили материал пациента и клинические данные.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Мы благодарим врачей Международного регистра тяжелой хронической нейтропении за предоставленный материал пациента.Мы благодарим испытуемых за их сотрудничество. Эта работа была поддержана Madeleine-Schickedanz Kinderkrebsstiftung, Fortüne Programm Тюбингенского университета, Else Kröner Fresenius Foundation (проект 2017_A45). Мы также признательны за поддержку Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) и Open Access Publishing Fund Тюбингенского университета.

Дополнительный материал

Дополнительный материал к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2019.00116/полный #доп.материал

Ссылки

1. Kyas U, Pietsch T, Welte K. Экспрессия рецепторов гранулоцитарного колониестимулирующего фактора на нейтрофилах пациентов с тяжелой врожденной нейтропенией и циклической нейтропенией. Кровь . (1992) 79: 1144–1147.

Реферат PubMed | Академия Google

2. Кляйн С., Грудзьен М., Аппасвами Г., Гермесхаузен М., Сандрок И., Шеффер А.А. и соавт. Дефицит HAX1 вызывает аутосомно-рецессивную тяжелую врожденную нейтропению (болезнь Костманна). Нат Жене. (2007) 39: 86–92. дои: 10.1038 / ng1940

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

4. Хорвиц М., Бенсон К.Ф., Персон Р.Е., Априкян А.Г., Дейл Д.С. Мутации в ELA2, кодирующем эластазу нейтрофилов, определяют 21-дневные биологические часы в циклическом гемопоэзе. Нат Жене. (1999) 23: 433-6. дои: 10.1038 / 70544

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

6. Boztug K, Appaswamy G, Ashikov A, Schäffer AA, Salzer U, Diestelhorst J, et al.Синдром с врожденной нейтропенией и мутациями в G6PC3. N Engl J Med. (2009) 360: 32–43. дои: 10.1056 / NEJMoa0805051

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

7. Person RE, Li FQ, Duan Z, Benson KF, Wechsler J, Papadaki HA, et al. Мутации в протоонкогене GFI1 вызывают нейтропению у человека и нацелены на ELA2. Нат Жене. (2003) 34: 308-12. дои: 10.1038 / ng1170

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

9.Девриендт К., Ким А.С., Матийс Г., Фринтс С.Г., Шварц М., Ван Ден Оорд Дж.Дж. и соавт. Конститутивно активирующая мутация в WASP вызывает Х-сцепленную тяжелую врожденную нейтропению. Нат Жене. (2001) 27: 313–7. дои: 10.1038 / 85886

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

10. Boztug K, Järvinen PM, Salzer E, Racek T, Mönch S, Garncarz W, et al. Дефицит JAGN1 вызывает аномальный гомеостаз миелоидных клеток и врожденную нейтропению. Нат Жене. (2014) 46: 1021–7.doi: 10.1038 / ng.3069

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

12. Донг Ф., Брюнес Р.К., Тидоу Н., Велте К., Лёвенберг Б., Таув И.П. Мутации в гене рецептора гранулоцитарного колониестимулирующего фактора у больных острым миелоидным лейкозом, которому предшествовала тяжелая врожденная нейтропения. N Engl J Med. (1995) 333: 487–93. дои: 10.1056 / NEJM199508243330804

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

13. Донг Ф., Дейл Д.К., Бонилла М.А., Фридман М., Фаст А., Нейенс Х.Дж. и соавт.Мутации в гене рецептора гранулоцитарного колониестимулирующего фактора у больных с тяжелой врожденной нейтропенией. Лейкемия . (1997) 11: 120–5. doi: 10.1038 / sj.leu.2400537

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

14. Tidow N, Pilz C, Kasper B, Welte K. Частота точечных мутаций в гене рецептора G-CSF у пациентов с хронической нейтропенией, получающих терапию G-CSF. Стволовые клетки . (1997) 15 (Приложение 1): 113-9. обсуждение 120.doi: 10.1002 / ствол 5530150815

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

15. Бернард Т., Гейл Р.Е., Эванс Дж.П., Линч Д.К. Мутации рецептора гранулоцитарного колониестимулирующего фактора у больных с тяжелой врожденной нейтропенией не обязательны для трансформации в острый миелоидный лейкоз и могут быть побочным явлением. Бр Ж Гематол. (1998) 101: 141–9. doi: 10.1046 / j.1365-2141.1998.00652.x

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

16.Хантер М.Г., Авалос Б.Р. Мутации рецептора гранулоцитарного колониестимулирующего фактора при тяжелой врожденной нейтропении, трансформирующейся в острый миелогенный лейкоз, придают устойчивость к апоптозу и повышают выживаемость клеток. Кровь . (2000) 95: 2132–7.

Реферат PubMed | Академия Google

17. Анклифф П.Дж., Гейл Р.Е., Лизнер Р., Ханн И., Линч Д.К. Долгосрочное наблюдение за мутациями рецептора гранулоцитарного колониестимулирующего фактора у пациентов с тяжелой врожденной нейтропенией: значение для лейкемогенеза и терапии. Бр Ж Гематол. (2003) 120: 685–90. doi: 10.1046 / j.1365-2141.2003.04160.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

18. Cassinat B, Bellanné-Chantelot C, Notz-Carrère A, Menot ML, Vaury C, Micheau M, et al. Скрининг мутаций рецептора Г-КСФ у пациентов с вторичной миелоидной или лимфоидной трансформацией тяжелой врожденной нейтропении. Отчет французского регистра нейтропении. Лейкемия . (2004) 18: 1553–5. дои: 10.1038 / сж.лей 2403431

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

19. Germeshausen M, Ballmaier M, Welte K. Частота мутаций CSF3R при тяжелой врожденной нейтропении и значение для лейкемогенеза: результаты долгосрочного исследования. Кровь . (2007) 109: 93–9. дои: 10.1182 / кровь-2006-02-004275

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

20. Skokowa J, Steinemann D, Katsman-Kuipers JE, Zeidler C, Klimenkova O, Klimiankou M, et al.Кооперативность мутаций RUNX1 и CSF3R при тяжелой врожденной нейтропении: уникальный путь миелоидного лейкемогенеза. Кровь . (2014) 123: 2229–37. дои: 10.1182 / кровь-2013-11-538025

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

21. Тидоу Н., Пильц С., Тайхманн Б., Мюллер-Брехлин А., Гермесхаузен М., Каспер Б. и соавт. Клиническая значимость точечных мутаций в цитоплазматическом домене гена рецептора гранулоцитарного колониестимулирующего фактора у больных с тяжелой врожденной нейтропенией. Кровь . (1997) 89: 2369–75.

Реферат PubMed | Академия Google

22. Qiu C, Xie Q, Zhang D, Chen Q, Hu J, Xu L. GM-CSF индуцирует экспрессию циклина D1 и пролиферацию эндотелиальных клеток-предшественников посредством передачи сигналов PI3K и MAPK. Cell Physiol Biochem. (2014) 33: 784–95. дои: 10.1159 / 000358652

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

23. Li H, Handsaker B, Wysoker A, Fennell T, Ruan J, Homer N, et al. Выравнивание последовательности / формат карты и SAMtools. Биоинформатика . (2009) 25: 2078–2079. doi: 10.1093 / биоинформатика / btp352

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

24. Макаров В., О'Грэйди Т., Кай Г., Лихм Дж., Буксбаум Д.Д., Юн С. AnnTools: комплексный и универсальный набор инструментов для аннотирования геномных вариантов. Биоинформатика . (2012) 28: 724–5. doi: 10.1093 / 2Fbioinformatics / 2Fbts032

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

25. Цзян Х., Лэй Р., Дин С.В., Чжу С.Skewer: быстрый и точный адаптер-триммер для секвенирования парных концов нового поколения. БМС Биоинформ . (2014) 15: 182. дои: 10.1186 / 1471-2105-15-182

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

27. Wilm A, Aw PP, Bertrand D, Yeo GH, Ong SH, Wong CH, et al. LoFreq: сверхчувствительный вызывающий вариант, учитывающий качество последовательности, для выявления неоднородности клеточной популяции из наборов данных высокопроизводительного секвенирования. Рез. нуклеиновых кислот. (2012) 40: 11189-201.doi: 10.1093 / нар / gks918

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

29. Уикхэм Х. Ggplot2: Элегантная графика для анализа данных. Спрингер (2009 г.). дои: 10.1007 / 978-0-387-98141-3

Полнотекстовая перекрестная ссылка

30. Команда RC. R: Язык и среда для статистических вычислений . (2015).

31. Таув И.П., ван де Гейн Г.Дж.М. Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор и его рецептор при нормальном развитии миелоидных клеток, лейкемии и родственных заболеваниях клеток крови. Front Biosci. (2007) 12: 800–15. дои: 10.2741/2103

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

32. Ward AC, Hermans MH, Smith L, van Aesch YM, Schelen AM, Antonissen C, et al. Тирозин-зависимые и -независимые механизмы активации STAT3 рецептором человеческого гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (G-CSF) по-разному используются в зависимости от концентрации G-CSF. Кровь . (1999) 93: 113–24.

Реферат PubMed | Академия Google

33.Климянкоу М., Клименкова О., Уэналан М., Зейдлер А., Меллор-Хейнеке С., Кандабарау С. и соавт. GM-CSF стимулирует гранулопоэз у пациентов с врожденной нейтропенией с двуаллельными гетерозиготными мутациями CSF3R с потерей функции. Кровь . (2015) 126: 1865–187. дои: 10.1182 / кровь-2015-07-661264

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

34. Wölfler A, Erkeland SJ, Bodner C, Valkhof M, Renner W, Leitner C, et al. Функциональный однонуклеотидный полиморфизм гена рецептора G-CSF предрасполагает людей к миелодиспластическому синдрому высокого риска. Кровь . (2005) 105: 3731–6. doi: 10.1182 / кровь-2004-06-2094

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

35. Pulsipher MA, Chitphakdithai P, Miller JP, Logan BR, King RJ, Rizzo JD, et al. Нежелательные явления среди 2408 неродственных доноров стволовых клеток периферической крови: результаты проспективного исследования Национальной программы доноров костного мозга. Кровь . (2009) 113: 3604-11. дои: 10.1182 / кровь-2008-08-175323

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

36.Bennett CL, Evens AM, Andritsos LA, Balasubramanian L, Mai M, Fisher MJ, et al. Гематологические злокачественные новообразования, развивающиеся у ранее здоровых людей, получавших гемопоэтические факторы роста: отчет проекта «Исследование нежелательных явлений и отчетов о лекарствах» (RADAR). Бр Ж Гематол. (2006) 135: 642–50. doi: 10.1111 / j.1365-2141.2006.06312.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

37. Hershman D, Neugut AI, Jacobson JS, Wang J, Tsai WY, McBride R, et al.Острый миелоидный лейкоз или миелодиспластический синдром после применения гранулоцитарных колониестимулирующих факторов во время адъювантной химиотерапии рака молочной железы. J Natl Cancer Inst. (2007) 99: 196-205. дои: 10.1093 / jnci / djk028

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

38. Xia J, Miller CA, Baty J, Ramesh A, Jotte MRM, Fulton RS, et al. Соматические мутации и клональное кроветворение при врожденной нейтропении. Кровь . (2018) 131: 408-16. дои: 10.1182 / кровь-2017-08-801985

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

40.Бикман Р., Валкхоф М.Г., Сандерс М.А., ван Стриен П.М., Хаанстра Дж.Р., Бродерс Л. и соавт. Последовательный набор мутаций при тяжелой врожденной нейтропении, прогрессирующей до острого миелоидного лейкоза. Кровь . (2012) 119: 5071–7. дои: 10.1182 / кровь-2012-01-406116

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

41. Skokowa J, Cario G, Uenalan M, Schambach A, Germeshausen M, Battmer K, et al. LEF-1 имеет решающее значение для нейтрофильного гранулоцитопоэза, и его экспрессия сильно снижена при врожденной нейтропении. Нац. мед. (2006) 12: 1191–7. дои: 10.1038 / nm1474

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

43. Уорд А.С., ван Эш Ю.М., Шелен А.М., Таув И.П. Дефектная интернализация и устойчивая активация рецептора колониестимулирующего фактора усеченных гранулоцитов обнаруживаются при тяжелой врожденной нейтропении/остром миелоидном лейкозе. Кровь . (1999) 93: 447–58.

Реферат PubMed | Академия Google

44. Hermans MH, Ward AC, Antonissen C, Karis A, Löwenberg B, Touw IP.Нарушение гранулопоэза у мышей с направленной мутацией в гене рецептора гранулоцитарного колониестимулирующего фактора связано с тяжелой хронической нейтропенией. Кровь . (1998) 92: 32–9.

Реферат PubMed | Академия Google

45. Hermans MH, Antonissen C, Ward AC, Mayen AE, Ploemacher RE, Touw IP. Устойчивая активация рецепторов и гиперпролиферация в ответ на гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (Г-КСФ) у мышей с тяжелой врожденной нейтропенией/мутацией, происходящей от острого миелоидного лейкоза, в гене рецептора Г-КСФ. J Exp Med. (1999) 189: 683–92. doi: 10.1084 / jem.189.4.683

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

46. Триот А., Ярвинен П.М., Аростеги Д.И., Муруган Д., Кохистани Н., Дапена Диас Д.Л. и соавт. Унаследованные двуаллельные мутации CSF3R при тяжелой врожденной нейтропении. Кровь . (2014) 123: 3811–7. дои: 10.1182 / кровь-2013-11-535419

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

47. Бернард Т., Гейл Р.Э., Линч Д.С.Анализ изоформ, полиморфизмов и мутаций рецепторов гранулоцитарного колониестимулирующего фактора в нормальных гемопоэтических клетках и бластах острого миелоидного лейкоза. Бр Ж Гематол. (1996) 93: 527–33. doi: 10.1046 / j.1365-2141.1996.d01-1696.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

48. Shibata S, Asano Y, Yokoyama T, Shimoda K, Nakashima H, Okamura S, et al. Анализ структуры гена рецептора гранулоцитарного колониестимулирующего фактора с помощью ПЦР-SSCP при миелоидном лейкозе и миелодиспластическом синдроме. Евро J Гематол. (1998) 60: 197-201. doi: 10.1111 / j.1600-0609.1998.tb01022.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

49. Forbes LV, Gale RE, Pizzey A, Pouwels K, Nathwani A, Linch DC. Активирующая мутация в трансмембранном домене рецептора гранулоцитарного колониестимулирующего фактора у больных острым миелоидным лейкозом. Онкоген . (2002) 21: 5981–9. doi: 10.1038 / sj.onc.1205767

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

.

Тромбопоэтин (ТПО) индуцирует гемопоэтическую дифференцировку ЭС клеток мыши посредством HIF-1 альфа-зависимой активации ауторегуляторной петли BMP4

https://doi.org/10.1182/blood.V126.23.1186.1186

Понимание молекулярных механизмов, лежащих в основе гемопоэтической дифференцировки эмбриональных стволовых (ЭС) клеток, может помочь установить оптимальные условия для производства гемопоэтических клеток в качестве источника для трансплантации или экспериментального использования.Ранее мы обнаружили, что пациенты с врожденной амегакариоцитарной тромбоцитопенией (САМТ), у которых развивается панцитопения сразу после рождения, имеют мутации в рецепторе тромбопоэтина (ТПО) c-mpl. Эти знания вместе с наблюдениями in vitro и на животных моделях in vivo позволяют предположить, что передача сигналов TPO/c-mpl способствует раннему гемопоэзу. Однако нижестоящие механизмы, лежащие в основе передачи сигналов TPO, полностью не выяснены. Здесь мы впервые описываем прямую связь между сигнальными путями TPO и костного морфогенетического белка 4 (BMP4) в решении гемопоэтической судьбы ES клеток.BMP4 является классическим морфогеном и хорошо известным индуктором ранней гемопоэтической дифференцировки ЭС клеток. Обработка ЭС клеток ТПО индуцировала аутокринную продукцию BMP4 ЭС клетками с сопутствующей активацией рецептора BMP, BMPR1A, фосфорилированием Smad1, 5 и 8 и активацией специфических генов-мишеней, Id1, 2 и 3, и Msx1. и 2. Это было опосредовано ТРО-зависимым связыванием фактора транскрипции HIF-1α с промотором гена BMP4, что приводило к дальнейшей активации BMP4-ауторегуляторной петли.Обработка ЭС клеток ноггином, антагонистом BMP, существенно снижала ТПО-зависимую гемопоэтическую дифференцировку ЭС клеток. В совокупности наши результаты способствуют пониманию механизмов гемопоэтической дифференцировки ЭС клеток и могут помочь в разработке новых методов эффективного производства гемопоэтических стволовых клеток in vitro .

Раскрытие информации

Отсутствие соответствующих конфликтов интересов для объявления.

Рекомендуемые статьи

Copyright © 2015 Американское общество гематологов

.90 000 Сочи 2014: блестящие польские фигуристы, у нас серебряная медаль! Медаль

для польских женщин была предопределена перед стартом финальной гонки, но путь к ней был непростым.В пятницу польки вышли в четвертьфинал, затем обыграли норвежок и на следующем этапе должны были встретиться с россиянками. Полуфинал был полон эмоций, но самым главным было то, что Бяло-Червоны победили российскую команду в составе Ольги Граф, Екатерины Шиховой и Юлии Скоковой.

Когда началась борьба за выход в финал (тогда в состав входила Наталья Червонка, а не Катажина Возняк), польки сразу резко выдвинулись вперед.Результатом стало лучшее время на первой контрольной точке, но было ясно, что русские будут ускоряться. Польки, однако, сохранили свое преимущество, и хотя с каждым кругом оно все больше и больше таяло, было ясно, что нас ждет потрясающий конец. За круг до финиша Бяло-Червоны имели преимущество в 0,68 секунды и, как оказалось, финиш принадлежал полячкам. На последнем замере перед финишем преимущество составляло уже 0,92 секунды и было известно, что финал может отнять у нас только трагедия.Трагедии не случилось, полячки выстояли до конца и выиграли полуфинал со временем 3.00,60! Россияне вышли к финишу с результатом 3.02.90 и теперь им предстоит побороться за бронзу.

полячек, напротив, стали готовиться к невообразимо трудной дуэли с голландками.С командой, которая с легкостью обыграла Японию в полуфинале, заодно установив олимпийский рекорд. Задача была невыполнима, но в спорте сенсаций было побольше.

В 16:21 по польскому времени обе команды уже были на льду, и был дан сигнал к началу гранд-финала.

К сожалению, польки уже на первом замере узнали, с какими потрясающими соперницами им предстоит бороться. Голландки двигались очень тяжело, и практически каждый замер увеличивал их преимущество перед польской командой.Польки спокойно ехали к финишу, а их соперницы стремились улучшить олимпийский рекорд.

В итоге к финишу пришли голландки с отличным временем 2.58.05 (новый олимпийский рекорд), а полячки с результатом 3.05.55. Соперники были вне досягаемости, но это было известно заранее.Как и серебряная медаль, которая так обрадовала польских женщин! После гонки наши участники от радости бросались на поверхность и сходили с ума от радости. И правильно! Серебро - отличный результат!

.

Podhale Sport - Интернет-портал Закопане

Польская конькобежка Катажина Бахледа-Курусь заняла 6-е место в беге на 1500 м. Луиза Злотковска заняла 11-е место, а Наталья Червонка - 15-е.


Катажина Бахледа-Курусь заняла 6-е место в соревновании фигуристов на дистанции 1500 м/ф.: Шимон Сикора На подиуме доминировали голландки. Олимпийской чемпионкой стала Джориен Тер Морс, серебряную медаль завоевала Ирин Вуст, а бронзовую медаль завоевала Лотте Ван Бик.

Соревнования фигуристок на 1500 м доставили болельщикам массу эмоций. Россиянка Ольга Фаткулина (1:57,88) показала очень хорошее выступление в пятом заезде, на последних метрах потеряла равновесие и чуть не упала, но сумела выйти вперед. Канадка Кали Крист (1:58,63) выступила чуть хуже в седьмом дуэте, после своего заезда она была второй. Голландка Йориен Тер Морс феноменально проявила себя перед самым перерывом, чистя лед.Она побила олимпийский рекорд со счетом 1:53,51, что однозначно вывело ее на первое место в соревнованиях.

Наталья Червонка стартовала первой из польских представительниц. Ее соперницей стала японка Нана Такаги, которой не довелось вступить в равную борьбу с полькой. Червонка показала время 1:58,46, что на тот момент дало ей 3-е место.

Другая польская спортсменка, Луиза Злотковска, бежала в одиннадцатой паре. До последних метров она боролась за победу с россиянкой Екатериной Шиковой, но соперница оказалась чуть лучше.Злотковская показала время 1: 58,18 и после гонки стала 4-й (сразу опередив Наталью Червоньку).

Голландка Маррит Ленстра (1:56,40) заняла второе место, а американка Хизер Ричардсон (1:57,60) – третье. Пятнадцатую пару сыграла голландка Ирин Вюст, но ей тоже не удалось обыграть Йориен Тер Морс, ведь она набрала 1:54,09, но это позволило ей занять позицию вице-мисс.

Наконец, на старт вышла Катажина Бахледа-Курусь, а ее конкуренткой стала россиянка Юлия Скокова.К сожалению, польке не удалось обойти Скокову, но она добилась хорошего результата 1:57,18 и заняла 5-е место после своей гонки.

Немка Клаудия Пехштейн и голландка Лотте Ван Бек соревновались в последней паре. Ван Бек (1:54,54) оказался лучше в этом дуэте и таким образом завоевал бронзовую медаль. Золото досталось Джориен Тер Морс, а серебро досталось Ирин Вуст. Польские женщины окончательно заняли 6-е (Бахледа-Курусь), 11-е (Злотковская) и 15-е (Червонка) места.

1.Йориен-тер-МОРС NED 1: 53.51

2.Ирин ВУСТ НЕД 1: 54,09 +0,58

3-й Лотте фургон БЕК NED 1: 54,54 +1,03

4th Marrit LEENSTRA NED 1: 56.40 +2.89

5.Юлия СКОКОВА РУС 1:56.45 +2.94

6. Катажина БАХЛЕДА - CURUS POL 1: 57.18 +3.67

7. Хизер РИЧАРДСОН США 1:57,60 +4,09

8.Екатерина ЛОБЫШЕВА РУС 1:57.70 +4.19

9-я Ольга ФАТКУЛИНА РУС 1:57.88 +4,37

10.Екатерина ШИХОВА РУС 1:58.09 +4.58

11. Луиза ЗЛОТКОВСКАЯ ПОЛ 1: 58.18 +4.67

12.Ида НЬЯАТУН НОР 1: 58.21 +4.70

13. Каролина ЕРБАНОВА ЧЕХИЯ 1: 58,23 +4,72

14. Бриттани БОУ США 1: 58,31 +4,80

15 Наталья ЧЕРВОНКА ПОЛ 1: 58.46 +4.95

16.Кали ХРИСТОС МОЖЕТ 1: 58,63 +5,12

17 Christine NESBITT CAN 1: 58,67 +5,16

18.Джиллинн РУКАРД США 1:59,15 +5,64

19.Клаудия ПЕЧШТЕЙН ГЕРМ 1: 59,47 +5,96

20 Елена ПЕТЕРС БЕЛ 1: 59,73 +6,22

21.КИМ Бо Реум КОР 1: 59,78 +6,27

22. Мисаки ОСИГИРИ JPN 2: 00.03 +6.52

23.ЧЖАО Синь ЧН 2: 00.27 +6.76

24. Моник АНГЕРМЮЛЛЕР ГЕР 2: 00.32 +6.81

25. Маки ТАБАТА JPN 2: 00.64 +7.13

26. Бриттани ШЮССЛЕР КАН. 2: 00,65 +7,14

27.ЛИ Циши ЧН 2: 00.89 +7.38

28. Екатерина АЙДОВА КАЗ 2 часа.93 +7.42

29.NOH Seon Yeong KOR 2: 01.07 +7.56

30. Габриэле ХИРШБИХЛЕР ГЕРМ 2: 01.18 +7.67

31. Аяка КИКУЧИ JPN 2: 01.29 +7.78

32. Нана ТАКАГИ Япония 2: 02.16 +8.65

33. Хеге БОККО НОР 2: 02.53 +9.02

34. Ванесса БИТТНЕР АВТ 2: 02.84 +9.33

35. BR YANG Shin Young KOR 2: 04.13 +10.62

.90 000 Сочи 2014 - конькобежный спорт: Неравный состав россиянок как шанс для полячек 90 001

INTERIA.PL приглашает вас на прямой текстовый отчет о командных конькобежных спринтах. Полуфинал с участием полячек с 14.30, бег за третье место с участием полячек с 14.51

В четвертьфинале с Канадой отлично поработала Граф (бронзовый призер на 3000 м), кроме нее храбро боролись Юлия Скокова и Екатерина Лобышва.

- Возможно, хозяева поменяют Лобышеву на Екатерину Шихову, это единственный вариант.Граф и Скокова обязательно поедут с нами, - сказала Катажина Бахледа-Курусь, которая, как и Граф в команде-сопернике, является лидером и лидирует в команде три круга из шести. О лучшем из "Сборны" отзывается без обиняков: - Тянет как русский пылесос

Польки готовятся не только к адски трудной субботней поездке, ставкой которой является выход в финал Олимпиады. бронзу из Ванкувера и вице-чемпион мира, завоеванный год назад прямо в Сочи, в «Адлер Арене» они тоже будут соревноваться с потрясающей российской публикой.

- Все трибуны будут с ними, но давайте помнить, что с Канадой они отдали себя на 110%, а в конце соревнований + ушли +. Не все выдержали темп. Тем не менее, сегодня они сталкиваются с еще одним трудным периодом. Я чувствую, что мы способны победить, - сказала Луиза Злотковска.

Команда тренера Кшиштофа Недзведского считается одной из самых сильных и ровных, с сильным дублером Катажиной Возняк. Изменений в составе с Россией не будет, поэтому на старте выйдут Бахледа-Курусь, Злотковска и Наталья Червонка.Последняя допустила фальстарт в четвертьфинале с Норвегией.

- Когда мы начали эту гонку во второй раз, у меня ужасно тряслись ноги, но уже на втором повороте все пропало, потому что включился автомат, - добавила Злотковская.

«Виновник» путаницы Червонка пообещал, что фальстарт с Россией больше не повторится. - Я впервые попал в командный турнир, немного нервничал. Я знаю, что должен пережить этот момент ухода. С русскими собираемся на полную катушку, хотя, полагаю, в этой суматохе мы ничего не услышим.Мы готовы к этому бою, - заверила она.

Польские конькобежцы явно спасались в концовке игры с норвежками, имея большое преимущество. Это тоже плюс для них перед полуфиналом. - Мы принимаем во внимание огромный ажиотаж на трибунах, но он нас тоже понесет, - заключил Бахледа-Курусь.

Из Сочи - Радослав Гело

Что, где, когда в Сочи включая передачи? Кликните сюда!

10, 6, 4? Сколько медалей поляки привезут из Сочи? Обсуждать!

.90 000 Сочи: сегодня шансы Ковальчик и конькобежцев - na newsweek.pl - Спорт

«Кася — наш любимый спортивный ребенок. Мы гордимся ее успехами.Мы ожидали очень хорошего выступления конькобежцев на Играх в Сочи, но то, чего они добились, превзошло наши ожидания. Мы знали, что они хорошо подготовились. Мы и во сне не видели трех медалей, по одной каждого цвета», — сказал PAP Анджей Кравчиньски, руководитель конькобежной трассы Стегна.

Она помнит, когда Катажина Возняк впервые вышла на трассу 14-15 лет назад и уже осталась на ней.Она поехала туда как участница «Четвергового катания на коньках» и была не единственной представительницей семьи, интересующейся конькобежным спортом. Тор был хорошо знаком своим сестрам — младшему Королю и старшей Марте.

Кравчиньски увлекается фигурным катанием и мечтает покрыть трассу в Стегнах.Он вырос в Гижицке, и там много лет назад зима длилась, как он говорит, с октября по апрель. Так что было много времени и возможностей полюбить конькобежный спорт.

Катажина Возняк четыре года назад в Ванкувере завоевала бронзовую медаль вместе с Луизой Злотковской и Катажиной Бахледа-Курусь.В Сочи улучшила цвет до серебристого.

17:00 Тренеры Пандыра и Гонсиор: бронза команды – это потрясающий успех

Даже попадание в четверку после победы с норвежцами стало большим успехом для мужской команды, считают тренеры по конькобежному спорту Марек Пандыра из школы Sports Championship в Закопане и Рафал Гонсиор из LKS Poroniec.

По словам Пандыры, которая руководила спортивным чемпионатом Яна Шиманского в школе Закопане, а также Гонсиора, который является тренером клуба в Поронце, Поронин, среди прочих.в Конрад Недзведский и Ян Шиманский, бронзовая медаль польской команды – большое событие.

«На мой взгляд, даже попадание в четверку было большим достижением, а подиум — потрясающей удачей.Вполне заслуженно, потому что они отлично провели все свои забеги, даже тактически», — подчеркнул Пандыра. Гонсиор также оценил хорошую тактику поляков.

При этом он добавил, увидев форму польских представителей, глубоко уверовал в их возможности.«Зная Конрада и Янека, а он был + золотой + Бродек, должно быть, это было хорошо. Мало того — я знал, что если Янек выйдет вперед на середине дистанции, он будет сильно тянуть. Он молодой игрок с много возможностей", - сказал тренер ЛКС Поронец Поронин.

Поляки, выступавшие в следующем составе: Збигнев Бродка (UKS Błyskawica Domaniewice), Конрад Недзведский и Ян Шиманский (оба LKS Poroniec Poronin), получили время 3-го41,94, опередив канадцев на 2,33 секунды.

16:30 Польки завоевали серебряную медаль

Польские конькобежцы уступили голландцам в финальном заезде командных соревнований на Олимпиаде в Сочи и завоевали серебряную медаль.

Бело-красная команда в составе: Катажина Бахледа-Курусь, Луиза Злотковска и Катажина Возняк показала третий результат.05.55. Голландки были явно быстрее. Они установили олимпийский рекорд с результатом 2,58,05.

В четвертьфинале и полуфинале вместо Возняк выступала Наталья Червонка.

Это шестая медаль Польши.Ранее золотые диски завоевали: Юстина Ковальчик в беге на 10 км, дважды Камиль Стох в соревнованиях на нормальном и большом трамплине и фигурист на 1500 м Збигнев Бродка, а бронзу завоевала конькобежная команда.

16:00 Бронза для Польши !!!

Польские конькобежцы выиграли у канадцев гонку за третье место в командном зачете на Олимпийских играх в Сочи и завоевали бронзовую медаль.

В состав польской команды входили: Збигнев Бродка (UKS Błyskawica Domaniewice), Конрад Недзвидски и Ян Шиманский (оба LKS Poroniec Poronin).Взяли время 3.41.94. Канадцы были медленнее на 2,33 секунды.

Это пятая медаль для Польши.Ранее золотые диски завоевали: Юстина Ковальчик в беге на 10 км, дважды Камиль Стох в соревнованиях на нормальном и большом трамплине и Бродек на 1500 м.

Фото: Гжегож Момот / PAP

14:30 Еще одна медаль для Польши!!!

Польские конькобежцы обыграли россиянок в полуфинале командных соревнований на Олимпиаде в Сочи.В субботу в гонке за золотыми медалями они встретятся с голландцами.

Бело-красная команда в составе Катажины Бахледа-Курусь, Луизы Злотковской и Натальи Червонки заняла третье место.00.6. Россиянки были на 1,49 с медленнее.

Победить голландок будет крайне сложно.«Оранжевые» женщины выбили японку в полуфинале и с результатом 2.58.43 установили олимпийский рекорд.

Четыре года назад в Ванкувере поляки завоевали бронзовую медаль.

Финал начнется в 15.00.14 по польскому времени.

14:15 Итоги субботы:

Спуск Юстины Ковальчик с трассы олимпийского забега на 30 км в Сочи пока является самым важным субботним событием.Победила норвежка Марит Бьорген. С другой стороны, украинская бегунья Марина Лысогор была уличена в употреблении допинга.

После 10 км Ковальчик была шестой, отставая от лидирующей норвежки Терезы Йохауг на 5,4 секунды.Пробежав еще 2,5 км, она опустилась на восьмую позицию, а ее потеря увеличилась до 29,4. Через несколько мгновений телекамеры показали, как она идет по маршруту с лыжами в руках.

«Сразу после старта я с кем-то зацепился за ногу.Я не знаю, с кем. Было много путаницы, и, к сожалению, что-то пошло не так с левой ногой. Я пытался, я пытался. Там, где было мягко и в гору, она еще шла, а вот на харде и поворотах - уже нет. И поэтому я пошел не по средствам, и тем более — в этом не было смысла», — заявил Ковальчик.

Полька приехала на игры — как выяснилось после тестов в деревне — со сломанной пятой плюсневой костью.Тем не менее, она завоевала золотую медаль в своей любимой гонке на 10 км классической техникой, вместе с Сильвией Яськовец, в командном спринте была пятой, а в комбинированной гонке – шестой.

«Я доволен тем, что сделал на этой Олимпиаде, ведь судьба мне и так многое дала здесь.Что дальше? Не знаю, я не склонен принимать какие-либо решения. А пока мы поблагодарили друг друга за эту Олимпиаду, за пять медалей. Что касается моего тренера, то он хочет продолжать работать, и команда тоже. Я не знаю, кому нужны подогретые заявления с сентябрьского сбора в Закопане...", - сказал Ковальчик, ссылаясь на пятничную информацию о том, что Веретелный собирается уйти в отставку после возвращения из Сочи.

Инвестиции других польских женщин: 33.Сильвия Яськовец - 4,42,4 поражения, 41. Паулина Мачушек - 7,39,5, 43. Корнелия Кубиньска - 8,52,5.

Бьорген опередила Йохауг на 2,6 секунды.Третье место заняла еще одна представительница страны фьордов Кристин Стоермер Стейра – 23,6 секунды Четвертая Финка Кертту Нисканен пересекла финишную черту почти через полторы минуты после победительницы.

Норвежки вырвались из лидирующей группы еще до 10 км и планомерно наращивали свое преимущество.Стейра немного ослабла примерно за километр до финиша. В последней серии атаки Бьорген не смогла отразить Йохауга.

За свою карьеру Бьорген уже завоевала 10 олимпийских медалей, в том числе шесть злотых.Более успешными спортсменами, выступающими на зимних Олимпийских играх, являются только двое ее соотечественников — биатлонист Уле-Эйнар Бьорндален (8-4-1) и лыжник Бьорн Дали (8-4-0).

В Сочи она трижды поднималась на верхнюю ступеньку пьедестала.Такой же трюк проделали белорусская биатлонистка Дарья Домрачева и россиянин корейского происхождения Виктор Ан, выступающий в шорт-треке.

В организме Лысохора обнаружен латриметазидин, сообщили в Олимпийском комитете Украины.Это третий случай применения допинга на Олимпиаде в Сочи. В пятницу немецкая биатлонистка Эви Захенбахер-Штеле и итальянский бобслеист Вильям Фруллани были исключены из Олимпиады.

30-летний игрок дважды занимал в Сочи 58 позицию.место - в беге на 10 км классической техникой и в спринте. В среду она отказалась стартовать в командном спринте.

В соревнованиях по параллельному слалому на сноуборде победила австрийка Юлия Дуймовиц.Серебряную медаль завоевала немка Анке Карстенс, а бронзу – ее соотечественница Амели Кобер. Оба представителя Польши выбыли из квалификации. Каролина Стокгольм заняла 25-е место, а Александра Круль - 30-е.

Российский сноубордист американского происхождения Вик Уайлд выиграл свою вторую золотую медаль в Сочи.После победы на гиганте он одержал победу в субботу в параллельном слаломе. Серебро завоевал словенец Зан Косир, а бронзу — австриец Бенджамин Карл. Поляки в этом соревновании участия не принимали.

Во второй половине дня внимание польских болельщиков будет приковано в первую очередь к ледовой трассе.Команда фигуристов на В 14.51 он начнет борьбу с канадцами за бронзовую медаль. На 20 минут раньше польские фигуристы отправятся на «Адлер Арену» в полуфинале командной гонки. Их соперницами станут россиянки. Бело-красные четыре года назад в Ванкувере потянулись за бронзовыми дисками.

12:06 - Даже на подъемах и в местах, где было мягко, я как-то терпел боль, но когда становилось тяжело, боль была невыносимой.Я хотел драться, но когда я был один и мне нужно было бить в лесу, я больше не мог этого делать. Я сочла бессмысленным бежать дальше, - сказала Юстина Ковальчик в эфире TVP Info.

11:55 Триумф Бьорген, Ковальчик не финишировала

Юстина Ковальчик сошла с трассы лыжной трассы на 30 км любой техникой на Олимпиаде в Сочи.Полька отказалась от соревнований примерно через 13 км. Победила норвежка Марит Бьорген. Она обогнала свою соотечественницу Терезу Йохауг на 2,6 секунды.

Третье место заняла еще одна представительница страны фьордов Кристин Стоермер Стейра – отставание 23,6 секунды.

Норвежки вырвались из лидирующей группы еще до 10 км и планомерно наращивали свое преимущество.Стейра немного ослабла примерно за километр до финиша. В последней серии атаки Бьорген не смогла отразить Йохауга.

После 10 км Ковальчик была шестой и отставала от лидирующей тогда Йохауг на 5,4 секунды.Пробежав еще 2,5 км, она опустилась на восьмую позицию, а ее потеря увеличилась до 29,4. Через несколько мгновений телекамеры показали, как она идет по маршруту с лыжами в руках.

Это был последний старт Ковальчика в Сочи.Он вернется из России с одной золотой медалью в классическом стиле на 10 км.

Инвестиции других польских женщин: 33.Сильвия Ясковец, 41 год. Паулина Мачушек, 43 года. Корнелия Кубиньска.

Фото: Армандо Бабани / PAP / EPA

11:46 Удивительный забег норвежки.Йохауг, Бьорген, Стейра. Убийственный темп!

11:20 Двадцатый километр.Норвежские женщины не меняют лыжи

11:10 Юстина Ковальчик сошла с трассы лыжной трассы на 30 км свободным стилем на Олимпиаде в Сочи.Полька отказалась от соревнований примерно через 13 км.

Нападающая Александра Веретельни была шестой после 10 км, а от лидирующей норвежки Терезы Йохауг она отставала на 5,4 секунды.Пробежав еще 2,5 км, она опустилась на восьмую позицию, а ее потеря увеличилась до 29,4. Через несколько мгновений телекамеры показали, как она идет по маршруту с лыжами в руках.

Это был последний старт Ковальчика в Сочи.Он вернется из России с одной золотой медалью в классическом стиле на 10 км.

Юстина Ковальчик стала шестой в лыжной гонке на 10 км вольным стилем на 30 км на Олимпийских играх в Сочи.Тереза ​​Йохауг отстает от лидирующей норвежки на 5,4 секунды.

Впереди группа норвежок, раздают себе переодевания, почти полчаса бега позади.Во главе Йохаука Ковальчик на пятничной позиции.

Бьорген едет первой, Ковальчик начала двигаться вперед.Юстина на шестом месте.

Группа пока растянулась, темп немного снизился.Юстина Ковальчик во второй десятке.

Вылетели 57 бегунов.Впереди две петли, всего 30 километров, из них два сложных подъема.

В 10:30 старт Юстины Ковальчик в беге на 30 км.Приглашаем вас в прямой эфир!

09:50 Бродек: медаль не будет бесплатной

Польские фигуристы встретятся с олимпийскими чемпионами из Ванкувера канадцами в борьбе за бронзу Олимпиады в Сочи.Збигнева Бродку, золотого медалиста в беге на 1500 м, ожидает очень трудный переход.

«Бронзу бесплатно никто не вручит.Мы хотели бы выйти так же хорошо, как и в четвертьфинале с Норвегией», — сказал Бродка, который формирует бело-красную команду с Конрадом Недзведским и Яном Шиманским.

Поляки отлично поработали в поединке со скандинавами, достигнув времени 3.42,78. Это чуть более чем на секунду меньше, чем рекорд страны, установленный на сверхбыстрой трассе в Калгари несколько месяцев назад - 3.41.72.

Фото: Гжегож Момот / PAP

09:30 Неравный состав россиянок как шанс для полячек

Лидер Ольга Граф и две более слабые фигуристки - так выглядит состав России на полуфинал с Польшей в командных олимпийских соревнованиях в Сочи.Бело-красные надеются, что хозяева вновь «вырвут».

В четвертьфинале с Канадой отлично поработала Граф (бронзовый призер на 3000 м), кроме нее храбро боролись Юлия Скокова и Екатерина Лобышево.

«Возможно, хозяева поменяют Лобышеву на Екатерину Шихову, и это единственный вариант.Граф и Скокова обязательно поедут с нами», — сказала Катажина Бахледа-Курусь, которая, как и Граф в команде-сопернике, является лидером и лидирует в команде на протяжении трех кругов из шести. О лучшем из «Сборны» говорит прямо: «Тянет, как русский пылесос».

08:48 Бег на 30 км (в10.30) станет последним стартом Ковальчик и Паулины Мачушек, Сильвии Ясковец и Корнелии Кубиньской в ​​Сочи. Спортсмен, проживающий в Касине Вельке, который бежит в Сочи со сломанной костью стопы, добился многих успехов на 30 км, используя обе техники, в т.ч. золото в Ванкувере и бронза в Турине, а также три медали чемпионатов мира, в том числе две «катающиеся».

Я был конкурентом фигуристов в борьбе за бронзу в командной гонке (на14.51) станут чемпионами Ванкувера 2010 канадцы. Лидером поляков является олимпийский чемпион на 1500 м Збигнев Бродка, а среди канадцев темп должен задавать двукратный призер из Сочи (серебро на 1000 м и бронза на 1500 м) Денни Моррисон. Помимо Бродки, в команду поедут также Ян Шиманский и Конрад Недзвидски. Год назад польское трио завоевало бронзу на чемпионате мира в Сочи.

Польские фигуристы за 20 минут до мужчин отправятся на «Адлер Арену» в полуфинале командной гонки.Их соперницами станут россиянки. Бело-красные завоевали бронзу в Канаде в 2010 году, а россияне были седьмыми. Катажина Бахледа-Курусь, Луиза Злотковска и Наталья Червонка обыграли норвежскую команду в четвертьфинале.

Поляки выступят и в других дисциплинах.В четверть седьмого по польскому времени Александра Круль и Каролина Стокгольм начнут квалификацию в параллельном слаломе на сноуборде. В горных лыжах в слаломе в группе из 117 участников будут соревноваться трое: Михал Ясичек, Мацей Быдлинский, Матеуш Гарневич.

Во второй половине дня начнутся соревнования по бобслею.Состоятся первая и вторая горки мужской четверки, в которой Давид Купчик, Даниэль Залевски, Михал Касперович и Павел Мроз сыграют в составе сборной Польши. Следующие два слайда пройдут в воскресенье, но в последнем примут участие только 20 лучших. Поляки хотят быть в этой группе.

Биатлонисты Кшиштоф Пливачик, Лукаш Щурек, Лукаш Слонина и Рафал Лепель получат последний шанс попрощаться с Олимпийскими играми, которые будут бежать на курорте Лаура в эстафете 4х7,5 км.

В матче за бронзу хоккейного турнира финны сыграют с американцами.

.

Смотрите также